Sadržaj
Hladni alkohol se koristi za odvajanje DNA od otopina na bazi vode, čime se omogućuje pročišćavanje za naknadno genetsko testiranje. Dodavanje alkohola u otopinu koja sadrži DNK je jednostavan način da se napravi čist na nižim temperaturama i usporava enzime koji ga razgrađuju, dajući bolje rezultate ekstrakcije.
Razbijanje staničnih zidova
Postupci ekstrakcije za dobivanje čiste DNK moraju se riješiti svih molekularnih i kemijskih komponenti tkiva iz kojeg je DNA ekstrahirana. Prvi koraci uključuju uništavanje zidova stanica. To se može učiniti s različitim kemijskim agensima koji su nagrizajući za stanične membrane, ali ne oštećuju DNA. Stanice se također mogu sonicirati, homogenizirati ili samljeti da bi se uništile membrane.
Uklanjanje lipida
Nakon što se zidovi stanica unište, dodaje se deterdžent kako bi se riješili masnoća i ulja koje čine stanične membrane. Deterdženti uzrokuju otapanje ulja i masti u otopini.
Uklanjanje proteina
Proteini i enzimi mogu se probaviti dodavanjem proteaze u otopinu. Proteaze razgrađuju proteine u male peptide i aminokiseline.
Precipitacija DNA
Dodavanje ledeno hladnog alkohola u otopinu precipitira se i agregira DNA. Genetski materijal može se prikupiti centrifugiranjem uzorka i dekantiranjem tekućeg sloja. Trebala bi postojati kao mali sediment na dnu epruvete za centrifugiranje.
Pročišćavajuća DNA
DNA se može isprati ponovnom suspenzijom u hladnoj alkoholnoj otopini i ponovno centrifugirati nekoliko puta da se dobije vrlo čist uzorak. Tipični alkoholi koji se koriste uključuju etanol i izopropanol. Ovaj proces ostavlja vrlo čist uzorak u rigoroznim testovima.
