Sadržaj
Studije s mikrobnim kulturama često zahtijevaju identifikaciju organizama koji se u njima nalaze. Kada se mali dio kulture unese na agar koji sadrži hranjivi medij, moguće je razdvojiti masu bakterija u pojedine jedinice koje formiraju kolonije. Svaka od ovih jedinica razvija se u diskretnim kolonijama, koje pokazuju karakteristike koje pomažu identificirati organizam.
Svrha
Studije mikrobiologije zahtijevaju proučavanje morfologije pojedinih organizama. U nekim slučajevima, organizmi koji su prisutni u mješovitoj kulturi moraju se odvojiti prije nego što se mogu analizirati. Stoga je važno izolirati ove mikrobiološke kolonije. Bakterijske kulture sadrže veliki broj stanica u jednoj kapi. Sjetva iscrpljivanjem na agar ploču ih razrjeđuje, tako da se jedna bakterijska stanica taloži na određenom području ploče. Nekoliko ovih pojedinačnih stanica razdvojeno je između nekoliko milimetara. Svaka od njih dijeli se stvarajući tisuće novih stanica, što stvara izolirane kolonije.
Načelo
Agar ploča pruža medij bogat hranjivim tvarima koji potiče rast i razmnožavanje mikroorganizama. Sjetva otpadnih voda koristi metodu prosipanja kvadranta, u kojoj je cijela ploča podijeljena u četiri kvadranta. Kako se krećete iz jednog kvadranta u drugi, postupno se razrjeđuje izvorna kultura na cijeloj raspoloživoj površini. Kvadrant u kojem započnete pokazuje gust i nerazlučen rast mikroba, koji izgleda poput saga mikroorganizama, dok posljednji prikazuje izolirane kolonije.
Materijali
Sjeme ispušnih plinova zahtijeva pločice s hranjivim agarima, petlju za inokulaciju, kulturu bakterija, otopinu za dezinfekciju, kao što je 10% lizola, i Bunsenov plamenik. Trebat će vam i zaštitna oprema, poput pregače, rukavica i zaštitnih naočala. Inokulum za stvaranje strija izrađen je od kulture bakterija pomoću petlje i grebanja hranjivih pločica agar. Bunsenov plamenik namijenjen je zapaljivanju ručke tijekom utora. Otopinom dezinficijensa očistite površinu prije početka eksperimenta.
Metoda
Upotrijebite malu količinu inokuluma za sijanje u prvi kvadrant pokretom naprijed-natrag. Zapalite ručku i pustite da se ohladi, dodirujući je dijelom ploče s agarima koji nije cijepljen. Dodirnite ga jednim krajem područja koje ste upravo posijali i proširite ga od tamo do drugog kvadranta. Ponovo zapalite i ohladite petlju, a iz drugog područja izradite treći kvadrant. Ponovite isti postupak s četvrtim kvadrantom.
