Sadržaj

• smjerovi
• Oporavak stupca
• savjeti
• upozorenje
• Što vam je potrebno

Tekuća kromatografija visoke djelotvornosti (HPLC) je uobičajena metoda laboratorijske analize u kojoj se uzorak razdvaja na svoje kemijske komponente kako prolazi kroz kolonu. Ovaj stupac se puni poroznim materijalom, tipično silika gelom. Standardni stupac reverzne faze, kao što je C8, ponekad se može začepiti ili kontaminirati. Ti se stupci mogu dobiti pomoću vrlo jednostavnih tehnika.

smjerovi

Desno otapalo može povratiti prljavu kolonu (Jupiterimages / liquidlibrary / Getty Images)

Oporavak stupca

1. Isključite stup i okrenite njegov položaj, tako da mobilna faza sada ulazi kroz ono što je normalno izlaz kolone. Pričvrstite utičnicu na drugi kraj stupca (koji je bio izvorni unos) i pustite ga da se isprazni.

2. Ispumpajte niz otapala prema reduciranom polaritetu. Preporučena osnovna serija je započeti s metanolom, zatim se prebaciti u acetonitril, zatim acetonitril / izopropanol (75:25), izopropanol, metilen klorid i heksan. Ako je mobilna faza koja je bila u koloni apsorbentna, preporučuje se prolaz s vodom prije u metanolu. Dovoljan je protok od jednog do dva mililitra u minuti i potrebno je pumpati približno deset stupaca volumena svakog otapala. Kolona za volumen je unutarnji prostor kolone i izračunava se pomoću (0,7 x pi x (DI / 2) ^ 2 x L), gdje je DI unutarnji promjer stupca i L je dužina.

   
   

3. U kolonu se pumpa još deset volumena izopropanola kako bi se pripremila za upotrebu s originalnom mobilnom fazom. Ako je originalna mobilna faza obložena, također ispumpajte vodu kroz kolonu nakon izopropanola, prije povratka u originalnu mobilnu fazu.

4. Isključite stup, okrenite ga natrag i ponovno se učvrstite tako da je u svom izvornom položaju (tako da pokretna faza ulazi u desnu stranu stupa). Ponovno spojite izlaz zvučnika na detektor.

savjeti

• Ako se ovim postupkom ne očisti temeljito kolona, ​​može se upotrijebiti smjesa dimetil sulfoksida (DMSO) i dimetilformamida (DMF). Ostaci proteina i metalnih iona mogu zahtijevati druge vrste otapala, kao što su reagensi koji štede ion, ili otopina etilen diamin tetra octene kiseline (EDTA).

upozorenje

• Kod nekih uređaja, kralježnica će imati grubo metalno sito kao ulaz. U tom slučaju, vraćanje stupca će omogućiti stacionarnoj fazi da napusti stupac, a to se ne preporučuje. Ako niste sigurni, posavjetujte se s prodavačem.
• Otapalo koje se koristi u ovom procesu je potencijalno otrovno kada se proguta i udiše. Pri rukovanju koristite normalne laboratorijske mjere opreza.

Što vam je potrebno

• HPLC uređaj
• voda
• metanol
• acetonitril
• izopropanol
• Metilen klorid
• heksan