Sadržaj
Tekuća kromatografija visokih performansi (HPLC) alat je koji se koristi za odvajanje tvari od smjese. Odvajanje i identifikacija određenih kemikalija događa se uglavnom u kromatografskom stupcu sustava. Za CLAE su dostupni mnogi tipovi stupaca, a svaki se koristi za određenu vrstu analize. Stupac C18 najjači je nepolarni općenito korišten. Nakon kontinuirane upotrebe tijekom duljeg vremenskog razdoblja, protok otapala kroz njega se smanjuje, a vrijeme analize povećava. Drugi uzrok smanjenja vremena analize je imati uzorke koji ostavljaju male količine kemikalija u materijalu kolone, smanjujući mogućnost njihovog razdvajanja. Obnavljanje njegove površine može se obaviti tretiranjem materijala nizom specifičnih otapala kako bi se očistilo od preostalih uzoraka i revitaliziralo noseći materijal.
Korak 1
Uklonite stupac C18 iz smjera protoka i postavite ga u suprotnom smjeru. Vraćanje otapala kroz njega ublažit će učinak nakupljanja koji se javlja tijekom vremena. Mora se paziti da se na kraju kolone ne ostavi previše materijala. Neke tvornice koriste veću mrežicu na vrhu, tako da kada protok promijeni smjer, mreža je u položaju ispod. Ova metoda obnove naziva se preokret protoka. Da biste spriječili da nakupljanje teče prema detektoru sustava i eventualno uzrokuje zapreke, dopustite mu da funkcionira bez priključenog detektora i usmjerite protok iz kolone na odlaganje.
Korak 2
Stavite cijev za prolazak otapala u niz otapala da se eluira bilo koji spoj koji se zadržava u koloni u suprotnom smjeru. Ta se otapala razlikuju po svojim hidrofilnim svojstvima. Mijenjajući ih, eluirat ćete spojeve jednako raznolike hidrofilne prirode. Uzastopno upotrebljavajte 50 ml svakog od sljedećih otapala: voda (ako koristite pufer), metanol, izopropanol, diklormetan, heksan, diklorometan i izopropanol.
3. korak
Vratite stupac u ispravan smjer i omogućite protok otapala kroz njega. Upotrijebite najmanje 75 ml za pranje prije nastavka. Testirajte ga uzorkom koji ste koristili kad je bio nov i provjerite rezultate. Obratite pažnju pri postizanju maksimalnih bodova zadržavanja i ukupnog vremena analize. Stupanj u kojem se ti atributi podudaraju s početnim testom dok je još bio nov pokazivat će stupanj u kojem je stupac obnovljen. Ako rezultati nisu zadovoljavajući, zamijenite stupac novim, a stari bacite.
