Sadržaj

• Bolje gledanje
• Identifikacija i klasifikacija
• Otkrivanje izvedivosti
• Identifikacija staničnih struktura

Mikrobiolozi proučavaju karakteristike mikroorganizama, poput algi, bakterija, protozoa, gljivica i virusa, pomoću mikroskopa. Iako je neke organizme, poput protozoa i stanica kvasca, lako vidjeti kroz dijapozitive, bakterijske stanice zahtijevaju bojanje. Znanstvenici su razvili nekoliko metoda, poput tehnike bojenja po Gramu, bojenja otpornog na kiseline i fluorescentnog bojenja kako bi poboljšali vizualizaciju bakterijskih stanica i staničnih struktura. Korištenjem takvih metoda bojanja moguće je identificirati strukturne karakteristike koje pomažu u klasifikaciji bakterija.

Bolje gledanje

Bakterijski organizmi toliko su mali da ih je većina vidljiva samo pod mikroskopom s moći povećavanja 1000 puta. Međutim, jednostavno povećanje veličine ne pruža dovoljan stupanj jasnoće, pa se bakterije prije promatranja moraju obojiti kako bi se osigurala jasnoća potrebna za vizualizaciju.

Identifikacija i klasifikacija

Bojenje bakterija radi razlikovanja vrsta bakterija poznato je kao diferencijalno bojenje. Gramova mrlja je diferencijalna mrlja koja razlikuje bakterije ovisno o sadržaju staničnih stijenki. U ovoj metodi bakterijske stanice reagiraju s kristalno ljubičastom bojom da bi prešle u ljubičastu. Dodavanjem sredstva za izbjeljivanje neke bakterijske stanice gube boju, dok druge ne. Dodavanjem safraninske boje, obezbojene stanice postaju crvene, dok bakterijske stanice koje ne gube boju ostaju ljubičaste. Stanice koje postaju crvene nazivaju se gram-negativnim organizmima, a stanice koje ne postaju crvene klasificiraju se kao gram-pozitivni organizmi. Tehnika bojenja po Gramu pruža brzu metodu za početnu identifikaciju bakterija uključenih u infekcije. Isto tako, postupak bojenja otporan na kiseline pomaže u specifičnom identificiranju organizama koji pripadaju klasi bakterija zvanim mikobakterije, poput Mycobacterium tuberculosis.

Otkrivanje izvedivosti

U uzorcima bakterijskih kultura često je važno otkriti prisutnost živih bakterijskih stanica. Metode poput fluorescentnog bojenja pomažu utvrditi jesu li stanice za uzgoj održive ili ne. Žive bakterije imaju sposobnost pretvoriti tetrazolij 5-cijano-2,3-ditolil-klorid (CTC) u boju koja pokazuje crvenu fluorescenciju. Stoga, kada kulture boje CTC emitiraju ove fluorescencije, to ukazuje na prisutnost održivih bakterija. Propidijev jodid je mrlja koja djeluje samo na nežive stanice koje imaju oštećene membrane i stoga je korisna u identificiranju mrtvih bakterijskih stanica.

Identifikacija staničnih struktura

Bojenje pruža metodu jasne vizualizacije različitih staničnih struktura. Na primjer, Feulgenova metoda bojanja omogućuje identifikaciju jezgre unutar bakterijskih stanica, dok je Albertovo bojanje korisno za vizualizaciju metakromatskih granula. Isto tako, tehnika srebrne impregnacije omogućuje identifikaciju spiroheta. Bičevi su lako uočljivi kad su obojeni Ryuovom bojom. Malahitno zeleno bojenje pomaže identificirati spore bakterija.